Ajustan técnica de diagnóstico y secuenciación genética de una bacteria que afecta a caninos

Se trata de estudios, hasta ahora, no disponibles en la región.

Ehrlichia canis es una bacteria intracelular obligada agente causal de la Ehrlichiosis monocítica canina, una enfermedad que afecta más comúnmente a los caninos domésticos, aunque en varias regiones del país se registraron casos de transmisión a otras especies animales y en seres humanos, siendo una patología con potencial zoonótico.

E. canis es transmitida principalmente por medio de la garrapata marrón del perro Rhipicephalus sanguineus.

La erlichiosis es una enfermedad cuyo diagnóstico se dificulta por la variedad de signos clínicos que experimenta el paciente, y se debe considerar además la posibilidad de comorbilidad con otros hemopatógenos.

Para el diagnóstico de ésta enfermedad existen diversos métodos, entre los que se encuentran la evaluación clínica, hemograma y frotis sanguíneo, ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas, inmunocromatografia y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La PCR versus las demás técnicas diagnósticas brinda especificidad y eficacia sin importar la fase de la enfermedad que cursa el paciente. Esta técnica detecta ADN del agente en fases tempranas donde no es posible detectar anticuerpos o en fases subclínicas donde el hallazgo de mórulas tiene baja incidencia.

Pero el diagnóstico molecular, por PCR, requiere de equipamiento y personal capacitado lo que limita su aplicación a centros de análisis específicos de Argentina.

En ese sentido, un proyecto de investigación de la UNNE avanza con alentadores resultados en la puesta a punto y estandarización de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) aplicada al diagnóstico de ehrlichiosis en caninos domésticos naturalmente infectados de la región del NEA.

Como parte del proyecto se trabaja en la secuenciación genética del amplicón (fragmento de ADN amplificado) utilizado para el diagnóstico, para caracterizar a la cepa circulante.

El estudio es realizado de manera conjunta entre el Instituto de Medicina Regional y la Facultad de Ciencias Veterinarias, ambos de la UNNE, y tiene como responsable a la médica veterinaria Silvia Lorena Mansilla Fernández, quien resultó distinguida con el premio al Mejor Trabajo del Área de Ciencias Agropecuarias, Categoría Posgrado, en la “XXVI Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas de la UNNE”.

DETALLE DEL PROYECTO

En el resumen presentado para XXVI Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas de la UNNE “Tipificación de Ehrlichia canis por secuenciación del gen dsb en perros naturalmente infectados de las provincias de Chaco y Corrientes, Argentina”, se detalla que se recolectaron muestras de sangre anticoagulada con EDTA de caninos sospechosos de ehrlichiosis de las ciudades de Resistencia y Barranqueras en la provincia de Chaco y de la ciudad de Corrientes y zonas aledañas en la provincia de Corrientes.

Los meses de muestreo se determinaron en función al vector, la garrapata Rhipicephalus sanguineus.

Para la detección molecular se realizó por técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional para detección de patógenos de la familia Anaplasmataceae y posteriormente para el género Ehrlichia sp. La detección de las bandas de amplificación se hizo por corrida electroforética en gel de agarosa al 1.5%.

Se seleccionaron al azar 3 muestras para su secuenciación en un trabajo en conjunto entre el Laboratorio de Bacteriología del Instituto de Medicina Regional (UNNE), el Laboratorio de Ecología de Enfermedades, el ICIVET Litoral y la Estación Experimental Agropecuaria Rafaela (EEA Rafaela), del Centro Regional Santa fe del Instituto de Tecnología Agropecuaria (INTA).

Estas secuencias se compararon con secuencias depositadas en el GenBank del NCBI.

RESULTADOS PARCIALES

El análisis realizado a la fecha muestra que las secuencias encontradas en perros naturalmente infectados de Chaco y Corrientes se corresponden en un 100% con las secuencias dsb de E. canis aisladas de perros en Argentina.

Según se concluye, el gen dsb de E. canis es apropiado para el diagnóstico, pero su carácter conservado no permite la diferenciación genética de las diferentes cepas dentro de la especie. Por ello se analiza incluir en el estudio genes con mayor polimorfismo para evidenciar variaciones genéticas intraespecíficas.

“La búsqueda de variaciones genéticas asociada a la presentación clínica de los pacientes en el estudio nos permitirá evaluar la virulencia de la cepa infectante de E. canis en la región” resaltó la autora del estudio.

Remarcó que el diagnóstico definitivo de la enfermedad en los perros es un verdadero reto debido a la variedad de los síntomas de los animales clínicamente enfermos, así como el gran porcentaje de animales portadores que no presentan manifestaciones clínicas.

RELEVANCIA DE LAS TÉCNICAS

La medica veterinaria Mansilla Fernández, quien viene estudiando la incidencia en caninos de distintas enfermedades hemotrópicas transmitidas por garrapatas, entre ellas la Ehrlichiosis, explicó que para su transmisión juegan un rol clave las garrapatas, que requieren tres hospedadores para completar su ciclo biológico que incluye huevo-larva-ninfa-adulto, y para mudar de un estadio a otro debe alimentarse del mismo o distinto hospedador.

La garrapata toma contacto con las bacterias al alimentarse de la sangre de un hospedador infectado y mantiene la infección en forma “transestadial”, mientras cambia de estadio (larva, ninfa y adulto). Al alimentarse de un hospedador sano trasmite el agente infeccioso adquirido previamente.

También debe considerarse cuestiones ambientales y sociales que inciden en la cadena de transmisión.

De allí la necesidad de realizar estudios integrales como se viene realizando desde el Instituto de Medicina Regional y la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNNE, siguiendo lo propuesto por la Organización Mundial de la Salud “One Health” que enfatiza que el enfoque multidisciplinario logra una salud óptima para las personas, los animales y nuestro medio ambiente.

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